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      產(chǎn)品分類Product categories
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      蛋白電泳 SDS-PAGE及Western blot

      蛋白電泳 SDS-PAGE原理

      SDS是一種陰離子表面活性劑,能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵,并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物,使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其本身原有的電荷,掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此,各種蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率,不再受原有電荷和分子形狀的影響,而只是棒長的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDS—PAGE)。實(shí)驗(yàn)使用過程中,還加入DTT或者巰基乙醇,以打開蛋白間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。SDS—PAGE常采用垂直板不連續(xù)系統(tǒng)(分離膠與濃縮膠)。

      一、樣品制備

      本公司有多種用于樣品制備的組織裂解液,每款裂解液會(huì)配備一管蛋白酶抑制劑pmsf。本公司還有多種蛋白酶抑制劑供您使用。

      • 實(shí)驗(yàn)試劑
      • 蛋白提取
      • 蛋白定量
      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱
      R0010RIPA_
      R0020普通RIPA
      R0030非變性組織細(xì)胞裂解液
      A8260Aprotinin 蛋白酶抑制劑(抑肽酶)
      P8100Pepstatin A 胃蛋白酶抑制劑
      P1260(All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物
      T8031Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制劑
      P1260(All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物
      539133Protease Inhibitor Cocktail Set VI
      539134Protease Inhibitor Cocktail Set III
      PC0030Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
      PC0010Bradford蛋白濃度測定試劑盒>
      PC0020BCA蛋白濃度測定試劑盒

      注:本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合于Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法。

      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱說明
      R0010RIPA組織/細(xì)胞裂解液在普通RIPA的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來,含蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑(配有一支PMSF)
      R0020RIPA組織/細(xì)胞裂解液RIPA經(jīng)典配方,適于絕大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的免疫實(shí)驗(yàn)。組成: 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存: 4 ºC避光
      R0030非變性組織/細(xì)胞裂解液非變性條件下裂解的蛋白產(chǎn)物大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性,因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。
      R0050核蛋白提取試劑盒 
      BC3640全蛋白提取試劑盒 
      BC3720植物蛋白提取試劑盒 
      BC3710全蛋白提取試劑盒(強(qiáng)) 
      BC3711全蛋白提取試劑盒(中) 
      BC3730磷酸化蛋白提取試劑盒 
      BC3740胞漿蛋白提取試劑盒 

      蛋白含量測定是以標(biāo)準(zhǔn)蛋白作為對照,根據(jù)蛋白濃度不同,吸光值不同而達(dá)到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值(紫外光譜吸收法)來定量,但更多的是用染料對蛋白進(jìn)行染色,利用染料與蛋白結(jié)合顯出與原染料及蛋白不同的吸光值來定量的。后一種方法應(yīng)用更普遍。蛋白定量方法的選擇,應(yīng)該考慮到蛋白結(jié)構(gòu)(標(biāo)準(zhǔn)品選擇)、蛋白溶液內(nèi)干擾物等因素的影響。

      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱組成說明
      PC0010Bradford蛋白濃度測定試劑盒
      5×G250染色液100ml2-8℃
      BSA(5 mg/ml)1ml-20ºC
      PBS稀釋液30ml2-8℃
      干擾物質(zhì)少, Tris、糖、甘油、巰基乙醇、氨、EDTA等均不干擾測定。
      PC0020BCA蛋白濃度測定試劑盒
      BCA Reagent100ml2-8℃
      Cu Reagent3.0ml2-8℃
      BSA(5 mg/ml)1ml-20ºC
      PBS稀釋液30ml2-8℃
      BCA法的顯著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。
      PC0030Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
      Folin酚甲試劑A200ml2-8℃
      Folin酚甲試劑B5ml2-8℃
      Folin酚乙試劑20ml2-8℃
      BSA(5 mg/ml)1ml-20ºC
      PBS稀釋液30ml2-8℃
      Lowry法測定較為不受脂類物質(zhì)干擾,適于脂類含量較高的樣品測定。也能耐受相當(dāng)濃度的去垢劑如SDS。

      二、蛋白電泳

       

      • 實(shí)驗(yàn)試劑
      • 預(yù)制膠
      • 制膠
      • 上樣及電泳
      • 染色

      SDS-PAGE如今已形成成熟的方案,實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的情況和習(xí)慣來選擇試劑。如選擇1、2、3、4、5、6、7、8、9全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。如10、11、12、13/14、16、9、20。還可選擇10、13/14、16、9、17、18、19、20。

      系號產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱系號產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱
      1T8060TRIS 三羥甲基氨基甲烷11S10514XSDS-PAGE分離膠緩沖液(PH=8.8)
      2G8200Glycine 甘氨酸12S10524XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液(PH=6.8)
      3S8010SDS 十二烷基硫酸鈉13P10164×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)
      4A8080Acrylamide 丙烯酰胺14P10154×蛋白上樣緩沖液(含DTT)
      5M8200N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺15D10701M DTT
      6A8090Ammonium Persulfate 過硫酸胺16A103010%過硫酸氨
      7D8220DTT 二硫蘇糖醇17T10201M Tris-HCL (PH6.8)
      8M8210β-Mercaptoethanol β-巰基乙醇18T10101.5M Tris-HCL(PH8.8)
      9T8090TEMED 四甲基乙二胺19S101010%SDS
      10A101030%丙烯酰胺(29:1)20T10705×Tris-甘氨酸電泳緩沖液

      凝膠配制表(一)

       分離膠12%分離膠10%分離膠8%濃縮膠(3%)
      總體積10ml10ml10ml5ml
      4X分離膠緩沖液(PH8.8)2.5ml2.5ml2.5ml0
      4X濃縮膠緩沖液(PH6.8)0001.25ml
      30%丙烯酰胺(29:1)4ml3.3ml2.7ml0.5ml
      ddH2O3.4ml4.1ml4.7ml3.2ml
      10%過硫酸銨100ul100ul100ul75ul
      TEMED10ul10ul10ul7.5ul

      凝膠配制表(二)

       分離膠12%分離膠10%分離膠8%濃縮膠(3%)
      總體積10ml10ml10ml5ml
      30%丙烯酰胺(29:1)4ml3.3ml2.7ml0.5ml
      1M Tris-HCL (PH6.8)0000.625ml
      1.5M Tris-HCL(PH8.8)2.5ml2.5ml2.5ml0
      10%SDS100ul100ul100ul50ul
      ddH2O3.3ml4.0ml4.6ml3.75ml
      10%過硫酸銨100ul100ul100ul75ul
      TEMED10ul10ul10ul7.5ul

      本公司的丙烯酰胺是29:1的,如需要定制其他規(guī)格的可以。 為了客戶實(shí)驗(yàn)方便,我們生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒(P1200)和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒(P1320),后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分離。包含了制膠的全部試劑,方便客戶操作。 如果您想節(jié)省時(shí)間,也可以使用我們的預(yù)制膠,無需配膠,直接跑電泳即可。本公司的上樣緩沖液既有用于非變性的(P1017、p1027)又有變性的(P1015、P1016、P1017、P1018),有不同的稀釋倍數(shù),可以滿足客戶的多種實(shí)驗(yàn)需求。 電泳緩沖液既有用于普通的tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)的產(chǎn)品(T1070),又有用于Bis-tris這種系統(tǒng)的MOPS緩沖液(T1510) 蛋白marker有多種,非預(yù)染marker、預(yù)染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且還有GE原裝的變性非變性marker,廣泛的分子量和用途供您選擇。

      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱
      P10154×蛋白上樣緩沖液(含DTT)P10164×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)
      P10182×蛋白上樣緩沖液(含DTT)P10192×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)
      P10174×非變性蛋白上樣緩沖液p10272×非變性蛋白上樣緩沖液
      T10705×Tris甘氨酸電泳緩沖液T1510Tris-Mops緩沖液(10×)
      PR1300-15次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 15TPR1400-20低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(14.4-97.4KD) 20T
      PR1500-10次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10TPR1600-20預(yù)染低分子量蛋白質(zhì)(14.4-97.4KD) 20T
      PR1700-10預(yù)染次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10TPR1800-10Western Blot Marker 10T(50ul)
      PR1900預(yù)染超低分子量蛋白marker(3.3-31KD) 20TPR1910彩虹180廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)
      PR1920彩虹245廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)PR1930彩虹245plus廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

      跑膠后的染色可以用銀染或者考染的方法,如果蛋白量少,推薦使用靈敏度高一些的銀染試劑盒(G7210),否則常規(guī)染色可以使用(P1305)和(P1300),其中P1300的優(yōu)點(diǎn)是染色時(shí)間短,半小時(shí)內(nèi)即可檢測到蛋白電泳條帶,節(jié)省了染色脫色的時(shí)間。

      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱
      C8430考馬斯亮藍(lán)R 250染色液
      P1300考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液
      P1305考馬斯亮藍(lán)染色套裝
      G7210PAGE凝膠銀染試劑盒
      PG00810-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔8%10片/盒
      PG01010-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔10%10片/盒
      PG01210-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔12%10片/盒
      PG01510-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔15%10片/盒
      PG41510-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔4~15%10片/盒
      PG42010-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔4~20%10片/盒
      PG82010-SPrecast-Gel預(yù)制膠變性預(yù)制膠10孔8~20%10片/盒
      PG00810-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔8%10片/盒
      PG01010-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔10%10片/盒
      PG01210-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔12%10片/盒
      PG01510-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔15%10片/盒
      PG41510-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔4-15%10片/盒
      PG42010-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔4~20%10片/盒
      PG82010-NPrecast-Gel預(yù)制膠非變性預(yù)制膠10孔8~20%10片/盒

      三、Western blot

      經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分,此技術(shù)稱為免疫印跡(Western blot)。Western blotting檢測系統(tǒng)除需要過氧化物酶標(biāo)記的各種二抗外,還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。

      • 轉(zhuǎn)膜
      • 顯色

      和PALL公司的尼龍膜和pvdf膜,具有0.22um和0.45um兩種規(guī)格。 轉(zhuǎn)膜后還可以用P0012(10×麗春紅)檢測轉(zhuǎn)膜效果,尤其是針對NC膜效果更佳。 為了節(jié)省成本和時(shí)間,您可以選擇本公司的SW3020(Western Blot膜再生液)對用過的膜進(jìn)行清洗,隨后,可以使用不同的抗體進(jìn)行下一輪Western Blot實(shí)驗(yàn)。 膜再生液實(shí)質(zhì)是在不影響膜上結(jié)合的抗原的條件下將抗體洗脫下來,實(shí)際操作中,膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度。 注意:適用于 ECL和類似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western 檢測。不適用于非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的 Western檢測,例如DAB,NBT/BCIP。

      產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱
      P001210×麗春紅
      SW3010膜封閉液
      A1800抗體稀釋液
      A1810一抗稀釋液
      A1820HRP標(biāo)記抗體稀釋液
      A1830AP標(biāo)記抗體稀釋液
      A1840熒光抗體稀釋液
      T10851×TBST

      實(shí)驗(yàn)操作過程中您可以針對不同的抗體選擇上面合適的稀釋液。

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