今天我給大家說說用CCK-8試劑做實驗時的注意事項:
1.第一次做實驗時,建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
2.接種時注意細胞懸液一定要混勻,以避免細胞沉淀下來,導(dǎo)致每孔中的細胞數(shù)量不一致。
3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),為減少誤差,建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。
4.建議采用多通道移液器,減少平行孔間的誤差,加CCK-8時,建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基液面下加,容易產(chǎn)生氣泡,干擾OD值。
5.若細胞培養(yǎng)時間較長,培養(yǎng)基顏色或pH發(fā)生變化,建議更換培養(yǎng)基后再加CCK-8,含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測定。
6.CCK-8對細胞的毒性非常低,其他的實驗,例如中性紅法或結(jié)晶紫法,也可在CCK-8法檢測完后繼續(xù)進行。
7.可以使用大于600nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定,CCK-8在參比波長處沒有吸光值,設(shè)定參比波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收。
8.如果實驗中待測物質(zhì)有氧化還原劑,在不含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物,然后加入CCK-8試劑在一定時間內(nèi)檢測,和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較(只加CCK-8試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應(yīng)。
9.加CCK-8試劑時速度要快,減少試劑在移液器上的殘留,加入CCK-8試劑后輕輕震培養(yǎng)板,為了避免加樣時由于CCK-8殘留在槍頭上所帶來的誤差,可以在加樣前用培養(yǎng)稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。
10.CCK-8反復(fù)凍融會增加背景值,干擾實驗測定。