1. Q：G8140 綠色熒光核酸染料(10000×)  染色，條帶不亮是為什么？

A：綠色熒光核酸染料特別適合于大片段 DNA 的檢測(cè)(大于 1kb 的片段,檢測(cè)靈敏度與 EB 相當(dāng));當(dāng) DNA 片段小于 1kb 時(shí),檢測(cè)靈敏度低于 EB,特別是低于 500bp 的片段, 綠色熒光核酸染料可能亮度很弱或檢測(cè)不到.如果檢測(cè)小片段的 DNA,請(qǐng)選用G8142,該染色劑適合于檢測(cè)所有片段大小的 DNA 片段。

一般的，100mL膠加10微升染料，如果覺得熒光較弱，可適當(dāng)增加染料用量。

2. Q：使用G8142 GoldView II 核酸染料 進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，膠回收PCR產(chǎn)物時(shí)，電泳結(jié)果顯示MARK和目的條帶均不清晰，呈彌散狀，后續(xù)實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

A：使用時(shí)，請(qǐng)將商品化的 Marker 用 1×DNA Loading Buffer 作 5-10 倍的稀釋，上樣 1-10µl, 以得到較好的結(jié)果(通常稀釋 10 倍后上樣 5ul)。對(duì)于待檢測(cè)樣品，通常僅需 1-2µl 即可。如果濃度較高，也須作一定倍數(shù)稀釋，否則會(huì)造成條帶不整，影響遷移速率。凝膠回收請(qǐng)選擇點(diǎn)染方法。

3. Q：提取量不夠？

A：一般的，增加樣本量是Z簡(jiǎn)單的方法。此外，吸附膜的主要原理是低溫結(jié)合、高溫洗脫。因此，在吸附柱靜置時(shí)，放在4°結(jié)合3-5min，再重新吸附一次，通過(guò)增加結(jié)合次數(shù)達(dá)到提高提取量的目的。如果提取的質(zhì)粒較小或拷貝數(shù)很低，可以在吸附那一步適當(dāng)加入少量的1/5-1/3的異丙醇，提高回收率（一般不建議）

4. Q：D1140 提取量有多少？

A：因質(zhì)?？截悢?shù)的差異性，不一定能夠上百。

5. Q：有專門用于提取質(zhì)粒的柱子嗎？

A：N1010和N1011-A都可以

6. Q：N1011-B 可以用于提取質(zhì)粒嗎？

A：不可以。只能用于提取基因組，提取質(zhì)粒會(huì)造成質(zhì)粒虛高。

7. Q：N1010 系列的柱子，可以容納多少體積溶液？

A：650-700微升左右

8. Q：提取出的質(zhì)粒用于測(cè)序，可以用你們的洗脫緩沖液?jiǎn)幔?/span>

A：可以的，一般情況下影響不大。如果不放心，可以換用無(wú)菌ddH2O洗脫。

9. Q：提取質(zhì)粒后，做轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)不出來(lái)？

A：一般優(yōu)先懷疑感受態(tài)，若確認(rèn)感受態(tài)沒問(wèn)題，再檢測(cè)是否用錯(cuò)抗生素或是操作中有問(wèn)題。如果確認(rèn)是質(zhì)粒的原因，可加大轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的用量（一般的，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化僅需1微升左右（質(zhì)粒濃度在500ng/ul左右），若質(zhì)粒濃度很低（小于100ng/ul），可以將質(zhì)粒用量提高至10微升）

10. Q：提取出的質(zhì)粒，PCR沒有條帶？

A：1.檢驗(yàn)引物是否適用；2.檢驗(yàn)程序是否合適；3.檢驗(yàn)自己操作過(guò)程中是否有問(wèn)題；4.質(zhì)粒濃度不可太高（一般PCR的質(zhì)粒濃度在50-100ng/ul之間）

11. Q：轉(zhuǎn)化質(zhì)粒是，可以加抗生素嗎？

A：可以的，不會(huì)影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率。

12. Q：沒有提出任何質(zhì)粒？

A:1.菌體老化（重新轉(zhuǎn)化或活化菌株）？2.裂解不充分；3.菌體中真的無(wú)質(zhì)粒；4.檢查試劑盒中的試劑有無(wú)出現(xiàn)沉淀；5.加洗脫液時(shí)，沒有加到吸附膜上或加的體積太少

13. Q：提出的質(zhì)粒PCR、酶切鑒定中有一個(gè)有問(wèn)題，能用嗎？

A：不能。

14. Q：P3110 pET-28a（+） 跑膠檢測(cè) 質(zhì)粒大小和說(shuō)明書上大小不一致。

A：如果想要跑膠檢測(cè)質(zhì)粒大小，需要先將質(zhì)粒進(jìn)行單酶切，將質(zhì)粒變?yōu)榫€性的再進(jìn)行跑膠鑒定。超螺旋或是開環(huán)狀態(tài)的質(zhì)粒都無(wú)法表示質(zhì)粒的大小。如果客戶不認(rèn)可單酶切結(jié)果，可以直接測(cè)序檢測(cè)。

15. Q：R1030 RNase A溶液(10mg/ml ) 使用RNase A從大腸桿菌中提質(zhì)粒，質(zhì)粒溶液中的 RNA沒有去掉。

A：RNase A溶液 工作濃度是200ug/ml  ；而客戶這邊10ug/ml  建議增大用量。

16. Q：質(zhì)粒全沒有被內(nèi)切酶切割？

A：1.酶活低，可以延長(zhǎng)時(shí)間或是用量；2.質(zhì)粒和酶活不匹配，優(yōu)化酶切條件；3.質(zhì)粒不純，含有SDS，酚，EDTA等內(nèi)切酶抑制因子；4.質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)突變了；5. DNA不存在該酶識(shí)別順序；6.buffer和酶不匹配

17. Q：16.質(zhì)粒酶切不全？

A：1.酶活低，可以延長(zhǎng)時(shí)間或是用量；2.質(zhì)粒和酶活不匹配，優(yōu)化酶切條件；3.沒有混勻酶切體系；4.buffer和酶不匹配

18. Q：DNA片段數(shù)目多于理倫值?

A：1.內(nèi)切酶星狀活性；2.其它內(nèi)切酶污染：換一支新的酶或buffer；3；底物中含其它DNA雜質(zhì)：重新提質(zhì)粒

19. Q：跑膠檢驗(yàn)時(shí)，條帶拖尾，模糊？

A：1.濃度過(guò)高；2.鹽離子高；3.有蛋白污染；4.降解了；5.換新的電泳液

20. Q：4.Q：那個(gè)柱子可以用于膠回收？（質(zhì)粒提取、膠回收、基因組、PAGE凝膠回收的試劑盒中的柱子）

A: N1030 離心式過(guò)濾柱，主要用于過(guò)濾碎膠等較大的雜質(zhì)

   N1010/N1012/N1011-A 可用于膠回收（質(zhì)粒、片段等）

   N1011-B  主要用于提基因組，不用于提質(zhì)粒（會(huì)虛高）

21. Q：質(zhì)粒提取類試劑盒中，所有的酶都是單發(fā)的嗎？

A：是的。因?yàn)橐话愣家?/span>-20保存。所以不放在試劑盒里。以附件形式單發(fā)（冰盒/冰袋）

22. Q：SN0020 細(xì)胞核提取試劑盒  小鼠肝臟組織，勻漿后離不下去。

A：加熱一下，讓溶液不要那么粘稠。