【生物小知識(shí)】胰蛋白酶消化細(xì)胞

2015-08-17索萊寶生物

細(xì)胞外含有多種胞外蛋白，如膠原蛋白，這些蛋白使細(xì)胞間或細(xì)胞與培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁粘連起來(lái)。用胰蛋白酶分解這些蛋白質(zhì)后就可以使它們分開(kāi)，這個(gè)過(guò)程叫做胰蛋白酶的消化作用。

貼壁細(xì)胞就是貼著細(xì)胞瓶底生長(zhǎng)的細(xì)胞，細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底后需要傳代，這個(gè)時(shí)候直接吹打細(xì)胞對(duì)細(xì)胞傷害很大，需要用胰蛋白酶對(duì)其消化，使細(xì)胞與瓶底貼合的沒(méi)那么牢固，這個(gè)時(shí)候就可以進(jìn)行吹打使其從瓶底脫落下來(lái)。

胰蛋白酶有消化作用，處理動(dòng)物組織后，可以使動(dòng)物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個(gè)細(xì)胞。一般消化細(xì)胞用0.25%的胰酶，而且時(shí)間一定要掌握好，一邊消化，一邊在顯微鏡下觀察，注意不能消化過(guò)了反而對(duì)細(xì)胞自身造成損傷。除了胰蛋白酶外膠原蛋白酶也可以使用，因?yàn)檫@兩種蛋白酶的pH活性比較適中。

我公司的胰蛋白酶消化液種類(lèi)全面，可以滿(mǎn)足大部分客戶(hù)需求。主推產(chǎn)品（T1300/T1320）胰蛋白酶-EDTA 消化液(含酚紅和不含酚紅)。

• 產(chǎn)品說(shuō)明 ：

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA 等，其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞外基質(zhì)）水解，使組織或貼壁細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

索萊寶生產(chǎn)的胰蛋白酶-EDTA 消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中，經(jīng)過(guò)濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。本產(chǎn)品具有方便快速、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化大多數(shù)貼壁細(xì)胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類(lèi)產(chǎn)品，酚紅具有pH指示作用。

保存：-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。

• 使用方法 ：

1. 貼壁細(xì)胞的消化：

a) 吸去培養(yǎng)液，用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液，蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 1-2 分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同，對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。

c) 顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

d) 如果發(fā)現(xiàn)消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。

e) 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000-2000g 離心 1 分鐘，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2. 組織的消化：

不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

• 注意事項(xiàng) ：

1．由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況，確定佳消化時(shí)間；消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)狀況；

2．胰蛋白酶-EDTA消化液不含抑菌劑，在使用過(guò)程中要特別注意無(wú)菌操作，避免消化液被微生物污染；

3．胰蛋白酶-EDTA消化液，不宜4℃長(zhǎng)期保存，切忌反復(fù)凍融，小量使用時(shí)建議分裝凍存；

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

T1300 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚紅 solarbio 100ml

T1320 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)含酚紅 solarbio 100ml

T1350 胰蛋白酶消化液(0.25%)不含酚紅 solarbio 100ml