磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶檢測(cè)試劑盒

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
紫外分光光度法

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào)：BC3310
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 45 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑 35 mL×1 瓶，-20℃避光保存；臨用前加入 35mL 試劑一溶解?？扇芙夂蠓盅b-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
試劑三：液體 45µL×1 支，4℃避光保存；臨用前加入蒸餾水按體積比 1：120 稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配；
試劑四：液體 155µL×1 支，4℃避光保存；臨用前加入蒸餾水按體積比 7：250 稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配；
試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解；可溶解后分裝-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說(shuō)明：
PEPCK（EC 4.1.1.32）廣泛存在于動(dòng)物、開(kāi)花植物、藻類、部分真菌和細(xì)菌中。該酶催化草酰乙酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇式丙酮酸,是調(diào)節(jié)糖異生途徑的第1限速酶。PEPCK 催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+，在 340nm 下測(cè)定 NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取：
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟：
1、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：將試劑二、試劑三、試劑四按 7:1:1（V:V:V）的比例配制工作液，工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。
3、將工作液置于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 5 分鐘。
4、操作表：在 1mL 石英比色皿中依次加入下列試劑：

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Hepatic c-Jun regulates glucose metabolism via FGF21 and modulates body temperature through the neural signals》 作者:FeiXiao15YajieGuo15JialiDeng1FeixiangYuan1YuzhongXiao1LijianHui2YuLi1ZhiminHu1YuncaiZhou3KaiLi3XiaoHan3QichenFang4WeipingJia4YanChen1HaoYing1QiweiZhai1ShanghaiChen1FeifanGuo 期刊:Molecular Metabolism 影響因子:6.181 PMID:30579932

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