產(chǎn)品名稱:DNA含量檢測試劑盒(細胞周期)
產(chǎn)品型號:CA1510
產(chǎn)品特點:DNA含量檢測試劑盒(細胞周期)貨號:CA1510規(guī)格:20T/50T保存:-20℃避光保存,一年有效。細胞周期是指連續(xù)分裂細胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。
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DNA含量檢測試劑盒(細胞周期)
DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)
貨號:CA1510
規(guī)格:20T/50T
保存:-20℃避光保存,一年有效。
產(chǎn)品說明 :
細胞周期是指連續(xù)分裂細胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過程中,細胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍,且在分裂結(jié)束時平均分配到兩個子細胞中去。細胞周期又可以分為間期和有絲分裂期,細胞間期常劃分為休眠期(G 0 ) ,DNA 合成前期(G 1 ) ,DNA 合成期(S) ,DNA 合成后期(G 2 ) ,整個周期可表示為 G 1 →S→G 2 →M。DNA 周期檢測可用來反應(yīng)細胞周期的各個期的狀況,即細胞增殖狀況。利用細胞內(nèi) DNA 能夠和熒光染料(如碘化丙啶 PI)結(jié)合的特性,細胞各個時期其 DNA 含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同,流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣。
細胞發(fā)生凋亡時,由于胞漿和染色質(zhì)濃縮,核裂解,產(chǎn)生凋亡小體,使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。
在細胞凋亡的早期,細胞對前向角光散射的能力顯著降低,對 90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期,前向角和 90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化來觀察凋亡細胞。用 PI 對細胞進行染色,凋亡細胞由于總 DNA 量降低,于正常 G 0 /G 1 細胞群前出現(xiàn) DNA 低染細胞群,即 G 1 峰前出現(xiàn)亞二倍體峰(sub-G 1 ),即細胞凋亡群。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細胞(懸浮、貼壁)的 DNA 含量(細胞周期)檢測。
試劑盒組成 :
試劑名稱 | CA1510-20T | CA1510-50T | 保存條件 |
RNase A | 2.0mL | 5.0mL | -20℃ |
PI 染色液 | 8.0mL | 20.0mL | -20℃避光 |
使用方法 :( 僅供參考 )
1, 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細胞凋亡,同時設(shè)立陰性對照組,并收集細胞。
2, 用 PBS 洗滌細胞一次,1500rpm,5min 離心收集,調(diào)整細胞濃度為 1×10 6 /ml,取 1ml 單細胞懸液。
3, 制備的單細胞懸液離心后,去除上清,在細胞中加入 70%預(yù)冷乙醇 500ul 固定 2 小時,4℃保存,染色前用 PBS 洗去固定液;如需要,細胞懸液可用 200 目細胞篩網(wǎng)過濾一次。
4, 細胞沉淀中加 100µl RNase A 溶液,重懸細胞,37℃水浴 30min。
5, 再加入 400µl PI 染色液混勻,4℃避光孵育 30min。
6, 上機檢測,記錄激發(fā)波長 488nm 處紅色熒光。
注意事項 :
碘化丙啶(PI)染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。
PI 有毒,操作時應(yīng)戴手套,并避免污染。
熒光染料都存在淬滅問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。
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