產(chǎn)品名稱:脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào):BC0660
產(chǎn)品特點(diǎn):脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測(cè)試劑盒脫氫抗壞血酸還原酶活性測(cè)定檢測(cè)試劑盒測(cè)定意義:DHAR 催化 GSH 還原 DHA 生成 AsA,調(diào)控細(xì)胞 AsA/DHA 比值,是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關(guān)鍵酶。
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脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測(cè)試劑盒
脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性測(cè)定試劑盒說明書
微量法
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào): BC0665
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 110 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 20 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3mL 蒸餾水充分溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3.5 mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四:液體 8 mL×1 瓶,4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑 10 mg×1 支,4℃避光保存。臨用前加入 1 mL 蒸餾水,配制成 10 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
脫氫抗壞血酸還原酶(Dehydroascorbate reductase,DHAR)是植物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶,是抗壞血酸-谷胱甘肽氧化循環(huán)中促進(jìn)抗壞血酸再生的關(guān)鍵酶。DHAR 在循環(huán)中利用抗壞血酸維持植物體內(nèi)抗壞血酸的正常代謝水平,保護(hù)細(xì)胞組分抵御氧化損傷方面發(fā)揮著重要作用。DHAR 催化還原性谷胱甘肽(GSH)還原脫氫抗壞血酸(DHA)生成 AsA,GSH 能和 5,5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲酸(TNB)和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。TNB 在波長(zhǎng) 412 nm 處具有大光吸收。通過測(cè)定 GSH 的減少速率,計(jì)算 DHAR 活性。
自備儀器和用品:
研缽/勻漿器、冰、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品的處理
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)1 : 5-10 的比例(建議稱取約 0.1 g 組織,加提取液 1 mL),冰上充分研磨勻漿,8000 g,4℃ 離心 10 min,取上清液置于冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)胞加入 1 mL 提取液),冰浴超聲超聲破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3s,間隔 7s,總時(shí)間 3 min);然后 8000 g,4℃,離心 10 min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接檢測(cè)。
二、DHAR 測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:將 10 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
相關(guān)文獻(xiàn):
《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者:Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子:3.404 PMID:30099273
脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測(cè)試劑盒
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