中文名稱:CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒 英文名稱:Cell Counting Kit-8 ?錄號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 包裝 CA1210-100 Cell Counting Kit-8 100 T 1ml CA1210-500 Cell Counting Kit-8 500 T 5ml CA1210-1000 Cell Counting Kit-8 1000 T 10ml CA1210-3000 Cell Counting Kit-8 3000 T 30ml 保存:4℃密封避光保存,有效期一年。 產(chǎn)品簡介: Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒,為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué) 名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的 快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8 試劑盒可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗 CCK-8 試劑盒使?說明: 一、制作標準曲線(測定細胞具體數(shù)量時) 1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,然后接種細胞。 2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3-5 個細胞濃度梯度,每組3-6 個復(fù)孔。 3、接種后培養(yǎng)細胞貼壁,然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值,制作出一條以細胞數(shù)量為橫 坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(試用 此標準曲線的前提是實驗的條件要*,便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時間。) 二、細胞活性檢測 1、在96 孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37℃,5% CO2 的條件下)。 2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD 值的讀數(shù))。 3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時。 4、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。 5、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V) 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。 三、細胞增值-毒性檢測 1、在96 孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(在37 ℃,5% CO2 的條件下)。 2、向培養(yǎng)板加入10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如:6、12、24 或48 小時)。 3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD 值的讀數(shù))。如果待測物質(zhì) 有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加 入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。 4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時。 5、用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。 6、如果暫時不測定OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V) 溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化 |